Un gruppo di messaggeri persiani si presenta a Sparta e chiede al re Leonida la sottomissione di Sparta per conto del Grande Re Serse. Gli spartani offesi dal comportamento dei messaggeri, per ordine del loro re, li uccidono gettandoli in un pozzo. Leonida si rende conto della guerra che incombe e quindi si reca dall'oracolo per spiegare agli efori il suo piano per contrastare i persiani e per chiederne l'approvazione. Il re spartano porta anche l'offerta rituale in oro come richiesto dalla tradizione. In realtà gli efori sono stati corrotti dai persiani e quindi interpretano le profezie in modo da fermare Leonida. L'oracolo ordina quindi al re di attendere la fine della festività della Carneia prima di iniziare la guerra. Nonostante gli avvertimenti Leonida raggruppa 300 dei migliori guerrieri spartani e si avvia a combattere contro i Persiani; formalmente i 300 sono la sua guardia personale e quindi il re non viola le richieste dell'oracolo. Durante il viaggio un gruppo di Arcadi si unisce alla spedizione di Leonida. Arrivati alle Termopili, gli spartani costruiscono un muro composto da cadaveri che costringe l'esercito persiano a infilarsi in una stretta gola. La battaglia da affrontare sarà durissima: i persiani infatti possiedono un esercito enorme. Alle Termopili Leonida incontra Efialte, uno spartano deforme salvato da una morte certa in tenera età: la società di Sparta infatti, è molto rigida: solo i bambini sani possono vivere, quelli deformi vengono gettati in un dirupo. Efialte informa il re dell'esistenza di un sentiero segreto seguendo il quale è possibile aggirare le Termopili e poi gli chiede di poter combattere con i 300 spartani. Leonida non asseconda la sua volontà poiché la sua deformità ne avrebbe fatto un elemento debole potenzialmente dannoso per la falange spartana. Prima dell'inizio della battaglia i persiani chiedono al re spartano di arrendersi, evitando così un'inutile battaglia, questi invece dichiara di voler combattere. Gli spartani utilizzano la formazione a falange all'interno della stretta gola delle Termopili, questa formazione permette ai soldati di bloccare l'avanzata persiana e di respingerla infliggendo gravi perdite al nemico. Serse, impressionato dalla tenacia dei soldati di Leonida, si reca a parlare personalmente con il re Spartano e gli offre, in cambio della resa, il titolo di governatore della Grecia. Leonida rifiuta l'offerta deridendo il Grande Re che, offeso dagli insulti dello spartano, invia contro i 300 il suo numeroso esercito, ma con scarsi risultati visto che per i primi due giorni tutti combattimenti vengono vinti dai soldati greci. Efialte intanto, si reca nel campo dei persiani e in cambio di una posizione di prestigio all'interno dell'esercito di Serse rivela il percorso segreto per attraversare le Termopili. Nello stesso tempo a Sparta la regina Gorgo su suggerimento di un consigliere cerca di convincere Terone ad aiutarla a convincere il consiglio spartano ad inviare l'intero esercito in guerra. Terone accetta di aiutare Leonida ma chiede in cambio favori sessuali alla regina che, per il bene del marito, acconsente. Intanto i greci vengono a sapere del tradimento di Efialte e vengono sorpresi alle spalle dall'esercito di Serse. Gli Arcadi decidono di ritirarsi in modo da evitare morte certa. Leonida e gli spartani invece rimangono al loro posto, come ordina la legge spartana, ma il re ordina a un suo guerriero (Delios), di tornare a Sparta e di raccontare la storia dei trecento in modo da convincere il consiglio spartano ad inviare in guerra l'intero esercito della città. Delios esegue l'ordine di Leonida e abbandona il campo con gli Arcadi. Intanto a Sparta la regina Gorgo si presenta davanti al consiglio per chiedere l'intervento dell'esercito. Terone non sostiene la regina ma anzi l'accusa di adulterio davanti all'intero consiglio. la regina furente per gli insulti subiti prende una spada e uccide Terone. Questo cade a terra morto e alcune sue monete rotolano per la sala del consiglio, monete persiane che rendono palese il suo tradimento. Alle Termopili i persiani circondano i 300 da tutti i lati e i messaggeri di Serse chiedono la resa di Leonida. Il Grande Re offre nuovamente il governo della grecia e Leonida in cambio della sua adorazione. Leonida si spoglia della propria armatura e con un movimento a sorpresa utilizza la propria lancia per ferire Serse e ricordare a questo la propria mortalità ("prima della fine della guerra si saprà che anche un Dio Re può sanguinare"). Serse ordina all'esercito di uccidere Leonida e gli arcieri persiani bersagliano da tutti i lati i 300 uccidendoli tutti compreso Leonida che morirà per ultimo. Delios torna a Sparta e riferisce al consiglio delle gesta dei 300. Un anno dopo Delios termina il racconto dei 300 davanti all'esercito dei greci al completo che stanno per affrontare l'esercito persiano. Delios ricorda che quell'esercito che riuscì con estrema difficoltà a vincere 300 spartani ora dovrà tremare davanti a 10.000 spartani e a 30.000 greci provenienti dalle altre città stato, ha inizio la battaglia di Platea.